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Percoll的使用注意事項(xiàng)
更新時(shí)間:2019-05-08   點(diǎn)擊次數(shù):3376次
   Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達(dá)1.3g/ml密度,采用預(yù)先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,Percoll不穿透生物膜,對(duì)細(xì)胞無毒害,因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒,還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。

  該法是純化淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的一種較好的方法,淋巴細(xì)胞純度高達(dá)98%,單核細(xì)胞純度可達(dá)78%。因?yàn)镻ercoll具有滲透性低、不穿透細(xì)胞、粘度低、密度高和無毒害等優(yōu)點(diǎn),與目前常用的密度梯度離心介質(zhì),包括蔗糖(Sucrose)、血清白蛋白(Serum albumin, ALB)、聚蔗糖(Ficoll)、氯化銫(CsCl)等相比,是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動(dòng)物細(xì)胞及其細(xì)胞器的分離,純化了包括人血液細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、紅血球細(xì)胞、白血球細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等在內(nèi)的十余種動(dòng)物細(xì)胞。這一技術(shù)也開始用于用于分離和純化植物原生質(zhì)體、核、葉綠體和線粒體。

  Percoll的使用注意事項(xiàng)

  A. 本分離液是敏光型的,在運(yùn)輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

  B. 待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時(shí)分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進(jìn)行。

  C. 由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時(shí)間,摸索佳的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。

  D. 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

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