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在使用程序降溫盒時有哪些注意事項呢?
更新時間:2021-11-06   點擊次數(shù):1047次
  細(xì)胞凍存有兩種方法:傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存,程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃,最后再放置到液氮槽中長期保存。
 
  程序降溫盒的使用注意事項如下:
 
  實驗室雖然有程序降溫凍存盒,但怎么使用一直都搞不明白,我覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細(xì)胞剛開始還沒凍的時候就是室溫),然后把細(xì)胞放進(jìn)去,再一起移到-80度,這樣才能實現(xiàn)程序降溫呢?
 
  時間使用長了,感覺里面的液體是不是異丙醇啊,使用時間長了會不會揮發(fā)或變質(zhì)什么的,要不要添加或維護(hù)一下呢,還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分,要補(bǔ)充嗎?
 
  經(jīng)驗1:凍存盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于最底線。
 
  凍存盒肯定是先放在室溫,然后放進(jìn)去細(xì)胞,置于-80,利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫。
 
  根據(jù)論壇里的討論,異丙醇使用過一段時間后是要更換的,但是我一直沒換過,也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。
 
  經(jīng)驗2:我們實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?,F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的,很方便,效果也不錯的。
 
  經(jīng)驗3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性:口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù):眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!
 
  經(jīng)驗4:應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達(dá)到刻度線,否則降溫效果會受到影響。
 
  經(jīng)驗5:凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環(huán)境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO 對細(xì)胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,等到出細(xì)胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。
 
  程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率,由于程序降溫盒內(nèi)存在99.99%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯,因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇
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