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該如何選擇判斷RIPA裂解液?看看這些吧
更新時間:2020-11-03   點擊次數(shù):3242次
  你知道該如何選擇判斷RIPA裂解液么?下面就讓我們一起來了解一下吧。
 
  一、如何選擇合適的RIPA裂解液?
 
  如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP,我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118),該裂解液在裂解細胞或組織后一般不會形成粘滯的透明狀DNA團塊,不必采用超聲處理就可進行下一步操作。同時,該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測。
 
  如果使用免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)的效果不是很好,那您的蛋白可能比較特殊,我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。
 
  如果您的蛋白是難溶性的蛋白,建議您可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液,如RIPA裂解液(強/中);如果您在做IP實驗的時候發(fā)現(xiàn)背景很高,即有很多非特異性蛋白被IP下來,這時候您需使用裂解強度較強的裂解液,比如RIPA裂解液(強/中)。
 
  反之,如果您發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法IP下來,則說明您使用的裂解液強度過強,此時需使用裂解強度較弱的裂解液,比如RIPA裂解液(弱)。
 
  二、如何判斷細胞的裂解程度?
 
  細胞裂解:加入RIPA后,充分裂解的細胞,沒有細胞沉淀,很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導(dǎo)致的;相反,如果RIPA裂解液后出現(xiàn)膠狀物體,離心不能沉淀則可能是蛋白太多,RIPA裂解液加入的量太少導(dǎo)致的。
 
  組織裂解:先將組織剪成細小的碎片,之后利用勻漿器或超聲破碎的方法,鏡檢顯示細胞破碎率大于90%,同時組織已經(jīng)*裂解,沒有明顯的小組織塊。之后按照細胞裂解的步驟進行裂解,裂解程度的判斷標(biāo)準(zhǔn)與細胞裂解一致。
 
  RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則需通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,如NF-κB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
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