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使用abcam抗體時(shí)有哪些知識(shí)點(diǎn)需要我們知道的
更新時(shí)間:2021-04-07   點(diǎn)擊次數(shù):1779次
  如果要用abcam抗體對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或者要用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究,請(qǐng)務(wù)必使用不含疊化鈉的制備物。這種抗菌劑對(duì)大部分生物體都有毒害作用:它會(huì)阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
 
  疊化鈉會(huì)干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。完成偶聯(lián)反應(yīng)之后,可使用疊化鈉保存抗體。另一種可用的抗菌劑是 0.01% 硫柳汞鈉(硫柳汞),這種物質(zhì)不含伯胺。
 
  抗體溶液中的氮化鈉可通過滲析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),疊化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊氮化物順利擴(kuò)散出去,而抗體得以保留。
 
  滲析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS,攪拌滲析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。
 
  反復(fù)凍融可能使抗體變性,導(dǎo)致抗體形成聚集體,從而降低其結(jié)合能力。
 
  對(duì)大部分抗體而言,在 -20 ℃ 下保存就已足夠;在 -80 ℃ 下保存并無明顯優(yōu)勢(shì)。應(yīng)避免使用無霜冰箱,因?yàn)榇祟惐涞膬鋈谘h(huán)(用于減少霜的形成)正是保存此類抗體需要避免的。
 
  出于相同的原因,應(yīng)將抗體樣品瓶放在冰箱中溫度波動(dòng)小的區(qū)域,例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱門架上。
 
  有些研究人員向抗體中加入冷凍保護(hù)劑甘油(終濃度為 50%)以防止凍融損壞;甘油可將冷凝點(diǎn)降至 -20 ℃ 以下。雖然這種方法可用于多種抗體,但我們僅對(duì)少數(shù)幾種 Abcam 抗體在這種保存條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)試,我們僅擔(dān)保遵循數(shù)據(jù)表建議進(jìn)行保存的抗體的性能。
 
  我們不建議在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液,因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷睦淠c(diǎn)。請(qǐng)注意,甘油可能會(huì)被細(xì)菌污染。如果加入了甘油或任何冷凍保護(hù)劑,應(yīng)當(dāng)小心操作,確保獲得無菌制備物。
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