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細胞凍存液 NobleRyder C0050;濟南供應細胞凍存液 NobleRyder C0050

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  • 更新時間:2024-08-28
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北京諾博萊德科技有限公司供應細胞凍存液 NobleRyder C0050量大優(yōu)惠,咨詢 :

北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū),是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務為一體的生物科技公司,公司主要經營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;產品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關試劑、細胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。

細胞凍存液 NobleRyder C0050

 北京諾博萊德科技有限公司供應細胞凍存液 NobleRyder C0050量大優(yōu)惠,咨詢 :      12158781

 

細胞凍存液主要是由血清和DMSO組成,適合于大多數(shù)細胞的凍存,其凍存方法與常規(guī)方法相同。

細胞的凍存和復蘇

 

一、原理

在不加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。

細胞復蘇時速度要快,使之迅速通過細胞zui易受損的-50℃,細胞仍能生長,活力受損不大。

目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。

二、操作步驟

(一)凍存
1、消化細胞(同實驗二),將細胞懸液收集至離心管中。
2、1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
3、沉淀加細胞凍存液,輕輕吹打均勻,計數(shù),調整至5×106/ml左右。
4、將懸液分至凍存管中,每管1 ml。
5、將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴,否則復蘇時易出現(xiàn)爆裂。
6、貼上標簽,寫明細胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。
7、按下列順序降溫:室溫→420分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30 1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
注意:操作時應小心,以免液氮凍傷。液氮定期檢查,隨時補充,不能揮發(fā)干凈,一般30立升的液氮能用11.5月。

(二)復蘇
1、準備一個茶缸或1000ml的燒壞,內裝2/337的溫水。
2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內融化。
3、打開凍存管,將細胞懸液吸到離心管中。
4、1000rpm離心10分鐘,棄去上清液。
5、沉淀加10ml培養(yǎng)液,吹打均勻,再離心10分鐘,棄上清液。
6、加適當培養(yǎng)基后將細胞轉移至培養(yǎng)瓶中,37培養(yǎng),第二天觀察生長情況。

三、試劑和器材
器材:液氮罐、凍存管(塑料螺口凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機等
試劑:0.25%胰酶、培養(yǎng)基、含保護劑的培養(yǎng)基(即凍存液)

 

 

 

 

細胞凍存液 NobleRyder C0050

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